胰腺導(dǎo)管腺癌（PDAC）占源胰腺癌癥的93%。PDAC被認(rèn)為是所有癌癥中最致命的，并且預(yù)后極差。PDAC患者總體上表現(xiàn)出高度的分子腫瘤異質(zhì)性，使治療復(fù)雜化，并阻礙了臨床試驗的成功。

目前的體外技術(shù)不能充分復(fù)制PDAC腫瘤微環(huán)境（TMEs）中復(fù)雜的基質(zhì)成分，也不能模擬給定腫瘤的獨特遺傳表型。因此目前迫切需要開發(fā)一種利用腫瘤相關(guān)信息預(yù)測藥物反應(yīng)的個性化治療方法。

鑒于此，美國芝加哥拉什大學(xué)Faraz Bishehsari教授團(tuán)隊開發(fā)了一種腫瘤芯片裝置，通過結(jié)合患者衍生類器官（PDOs）和基質(zhì)細(xì)胞，特別是胰腺星狀細(xì)胞（PSCs）和巨噬細(xì)胞（U937），成功建立了一個復(fù)雜的包含纖維增生間質(zhì)和免疫細(xì)胞的腫瘤環(huán)境，延長了PDOs細(xì)胞功能和壽命，且證明了靶向基質(zhì)導(dǎo)致對癌細(xì)胞的化療效果顯著增加，從而驗證了該腫瘤芯片裝置用于藥物測試的可行性。

首先，研究人員通過細(xì)針活檢（FNB）收集PDAC患者的活檢樣本，經(jīng)過培養(yǎng)使其在3D基質(zhì)膠環(huán)境中形成球形類器官。

H&E和上皮細(xì)胞粘附分子（EpCAM）染色實驗驗證了類器官細(xì)胞與原始組織在結(jié)構(gòu)和功能上的一致性。將基質(zhì)細(xì)胞（PSCs和U937）和類器官共培養(yǎng)，U937和類器官發(fā)生雙向誘導(dǎo)增殖，且類器官平均直徑均明顯大于單獨培養(yǎng)時，免疫熒光成像顯示PSCs分泌了更多的膠原蛋白。

并且在MIA PaCa-2細(xì)胞（一種胰腺細(xì)胞系）中也觀察到癌細(xì)胞和U937細(xì)胞在共培養(yǎng)時的雙向增殖效應(yīng)。

圖1 患者來源的類器官（PDOs）的增殖特性，以及與基質(zhì)細(xì)胞的雙向促進(jìn)作用

腫瘤細(xì)胞的侵襲性實驗顯示PCCs在與基質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)時遷移的距離更大，同時H&E和EpCAM染色證實了遷移的細(xì)胞是PCCs。該實驗表明共培養(yǎng)時基質(zhì)細(xì)胞能誘導(dǎo)PCCs的侵襲性。

圖2 基質(zhì)細(xì)胞增加了癌變上皮細(xì)胞（PDOs）的侵襲性

該微流控芯片由兩個被多孔膜隔開的腔室組成，從上部腔室的入口裝載細(xì)胞，下層的腔室入口通過導(dǎo)管與含有培養(yǎng)基（有機類培養(yǎng)基∶RPMI=1∶1）的注射器相連，注射器與泵相連以5ul/h的流速持續(xù)灌注介質(zhì)。為了觀察PCCs的生長情況，將2000個類器官懸浮于50%基質(zhì)膠中，載入每個芯片的上腔室，培養(yǎng)1周后，類器官從球形轉(zhuǎn)化為二維（2D）結(jié)構(gòu)，這些細(xì)胞被稱為PCCs。

PCCs在16天內(nèi)占據(jù)了該室的整個內(nèi)部空間。最初，類有機物由基質(zhì)凝膠支撐，以保持芯片中的3D球形結(jié)構(gòu)，但最終轉(zhuǎn)變成2D層，這可能是基質(zhì)膠降解的結(jié)果。

接下來研究人員進(jìn)行了活-死生存實驗證明了芯片表明2D細(xì)胞的存活，同時癌變上皮細(xì)胞膜中EpCAM和pERK的表達(dá)水平也表明了細(xì)胞存活和生長。隨后的共培養(yǎng)和藥物治療研究實驗均在3D類器官仍存在的9天內(nèi)進(jìn)行。

圖3 一種用于PDOs的培養(yǎng)和生長的雙室微流控芯片

為了概括PDAC TME的特征，研究人員將基質(zhì)細(xì)胞與PCCs結(jié)合，并將它們加載到芯片的上腔。在共培養(yǎng)6天里，PCCs生長并發(fā)生結(jié)締組織塑性反應(yīng)。到第6天，基質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)芯片中的PCC生長明顯快于單獨培養(yǎng)時，占據(jù)了腔室空間的83.6%，證實了基質(zhì)對芯片中PCC增殖的影響。

與芯片相比，細(xì)胞的平行多孔板共培養(yǎng)顯示出顯著較低的癌細(xì)胞生長，這進(jìn)一步支持了使用芯片作為一個優(yōu)越的平臺來再現(xiàn)癌細(xì)胞的旺盛生長。

圖4 原發(fā)癌細(xì)胞（PCC）與基質(zhì)細(xì)胞在芯片上的生長

明場成像和H&E染色顯示了PCCs與芯片中基質(zhì)細(xì)胞的密切相互作用。U937細(xì)胞和PSCs中CD68和α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）的染色分別揭示了PCCs周圍基質(zhì)細(xì)胞的存在。

同時幾種標(biāo)記物在基因表達(dá)水平上進(jìn)一步表征了共培養(yǎng)的PSCs和U937細(xì)胞。

圖5 在芯片中PDAC TME的再現(xiàn)

為了表征芯片的藥物反應(yīng)測試功能，研究人員首先分別在PSCs、U937細(xì)胞和類器官中測定了ATRA、Clodrosome和吉西他濱的IC50值。且實驗表明基質(zhì)消耗劑的IC50值不影響PCCs或MIA PaCa-2細(xì)胞的存活力。

用來自一名患者的類器官考查PCCs的體外藥物反應(yīng)，將細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞一起接種到芯片中，培養(yǎng)6天后，將吉西他濱或吉西他濱與ATRA和Clodrosome以其IC50值灌注芯片72h，然后在第9天PFA固定和染色，與未經(jīng)治療相比，吉西他濱誘導(dǎo)的PCC Caspase-3表達(dá)可評估顯著的PCC凋亡。結(jié)果顯示，在腫瘤芯片模型中，TME調(diào)節(jié)劑對化療的抗腫瘤療效有增強作用。

圖6 基質(zhì)消耗在化療反應(yīng)中的影響

在這項研究中，研究人員開發(fā)了一種最先進(jìn)的多細(xì)胞組織芯片模型，該模型顯示了原代PDOs長期細(xì)胞存活率的提高，證實了基質(zhì)細(xì)胞在PDAC惡化中的顯著影響，以及癌性上皮細(xì)胞通過膠原沉積和癌癥相關(guān)基因表達(dá)劫持基質(zhì)細(xì)胞功能以創(chuàng)造有利TME的能力。

PDOs和基質(zhì)細(xì)胞在微流控芯片裝置中的共培養(yǎng)可再現(xiàn)特定患者的TME，因此可用于在臨床應(yīng)用前在實驗室中評估任何抗癌藥物的敏感性。最后，可通過提供所需的技術(shù)數(shù)據(jù)來設(shè)計可以優(yōu)化藥物反應(yīng)的生物測定工具，從而推進(jìn)PDAC個性化/精準(zhǔn)醫(yī)療的實施。

論文鏈接：

https://doi.org/10.1038/s41378-022-00370-6

審核編輯：劉清