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      神經(jīng)細(xì)胞膜電位變化的熒光成像

      jf_64961214 ? 來源：jf_64961214 ? 作者：jf_64961214 ? 2023-07-07 06:48 ? 次閱讀
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      wKgaomSnRNWAVMtzAADknoBLQ-w514.png

      所用相機：

      wKgZomSnRNWAZDcoAABdfRLvKpk876.jpg

      ORCA-Flash4.0 V3(C13440-20CU)

      成像方法：

      寬場熒光

      應(yīng)用描述：

      電壓敏感的熒光蛋白定位于細(xì)胞膜上，與離子通道相偶聯(lián)。神經(jīng)細(xì)胞的膜電位變化會引起該蛋白熒光強弱的變化，從而使膜電位“可視化”。傳統(tǒng)的CCD或普通高速CMOS相機由于靈敏度和幀速上限太低，往往和肉眼觀察一樣，分辨不出熒光信號的快速變化;該實驗使用濱松Flash4.0 V3，在USB 3.0的連接方式下將幀速提高至1,0000 fps，使1 ms內(nèi)的熒光變化也能夠清晰的呈現(xiàn)出來。

      # 詳細(xì)描述

      該實驗使用胚胎期電轉(zhuǎn)質(zhì)粒的方式，讓小鼠腦部特定類群的神經(jīng)元表達電壓敏感的熒光蛋白ASAP1，配合膜片鉗系統(tǒng)對腦片中被標(biāo)記的神經(jīng)元給予電刺激，使其膜電位產(chǎn)生變化;同時利用Flash4.0 V3的超高速成像能力，捕捉熒光信號的實時變化。

      1. 在512*128的ROI(region of interst)下，可以用1600 fps的幀速記錄單個神經(jīng)細(xì)胞胞體的膜電位變化。

      wKgaomSnRNWADZwaAABz1V6skO0335.png

      wKgZomSnRNWAUV8iAABRLe6E5ak075.jpg

      2. 在512*8的ROI下，其幀速可以達到10000 fps。在該尺度下可以達到每個電位的Spike記錄5-10個采樣數(shù)據(jù)點，且其信號的信噪比仍然很好。

      wKgaomSnRNWAQS1UAAC4S5g_l4g178.png

      3. 成像系統(tǒng)配置：Olympus BX51WI + Hamamatsu Flash4.0 V3

      wKgZomSnRNaACfMnAAEkGHaYSYY211.jpg



      審核編輯 黃宇

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